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创建时间:04-07

表达猪瘟病毒石门株E2基因重组腺病毒载体的构建

表达猪瘟病毒石门株E2基因重组腺病毒载体的构建

 Construction of the Recombinant Adenovirus Plasmid Expressing E2 Antigen of Classical swine fever virus Shimen strain 

摘    要

猪瘟病毒是影响畜牧业最重要的病原体之一,其囊膜糖蛋白E2是诱导中和抗体及激发保护性免疫应答的主要抗原。E2基因是CSFV全基因组中变异最大的部分,因而E2基因在CSFV的研究中倍受重视。本文应用PCR以pMD18-T-E2质粒为模板,扩增编码猪瘟病毒E2基因片段,回收后通过限制性内切酶Kpn I 和Xho I连接至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,阳性克隆命名为pAdTrack-E2,将pAdTrack-E2用限制性内切酶Pme I线性化,直接转化含有腺病毒骨架质粒pAdEasier的BJ5183感受态细胞,获得重组的腺病毒骨架pAdEasy-E2。本试验为猪瘟基因工程疫苗的研制奠定基础。
关键词:猪瘟病毒;E2基因;腺病毒


ABSTRACT

Classical swine fever virus is one of the most important pathogens affecting the livestock industry. the envelope glycoprotein E2 is the main protective antigen which can stimulate neutralizing antibodies response. The E2 gene is the main variation in CSFV genome which has been paid much attention. In this paper, pMD18-T-E2 plasmid was used as a template to amplify Classical swine fever virus E2 gene fragments. The fragment was inserted into adenovirus shuttle vector pAdTrack-CMV by Kpn I and Xho I restriction endonuclease, and the recombinant adenovirus was named pAdTrack-E2. Linearized with restriction endonuclease Pme I, pAdTrack-E2 was inserted into adenovirus skeleton plasmid in BJ5183 competent cells to get recombinat adenovirus skeleton pAadEasy-E2. The study will lay a foundation for CSFV genetic engineering vaccine.
Keywords: Classical swine fever virus; E2 gene; Adenovirus homologous

1 前言
    猪瘟是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种烈性传染病,被国际动物卫生组织列为A类动物传染病,我国将其列为一类传染病。猪瘟具有高度接触传染性,流行广泛,发病率高的特点,是危害我国养猪业最重要的传染病之一[1]。对于猪瘟病毒的研究,最早是在1885年和1886年由Salown和Smith进行的。近几年来,通过对瘟病毒的蛋白结构、核酸序列以及基因重组和表达等方面的深入研究,证明了该属病毒的基因结构、复制类型以及表达方式和黄病毒极为相似,应归属于黄病毒科(Flaviviridae)。猪瘟的发现己有近两百年的历史了,虽然世界各国对该病的防控做出了巨大的努力,而且在北美、澳洲和北欧的一些地区还成功地消灭了猪瘟,但猪瘟在世界的许多地区仍广泛传播,并造成巨大的经济损失。目前,猪瘟的发生主要在亚洲、非洲、南美洲和欧洲的44个国家和地区,CSF的暴发对猪及猪制品的贸易带来严重的影响,通常会造成巨大的经济

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