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创建时间:07-16

积雪草苷提取纯化工艺研究

积雪草(Centella asiatica L Urban.)为伞形科积雪草属植物如图1.1,主要分布于我国长江流域以南各省,国外印度、斯里兰卡、马达加斯加等地也有分布,为我国传统中药,是《中国药典》收载的常用中药。始载于《神农本草经》,列为中品,具有清热利湿、解毒消肿的功效。据《本草纲目》记载积雪草其味苦,性寒,无毒。主治由热引起的恶疮,痈疽,全身皮肤发红、发热。捣成汁服,主治高热,小儿热病。单用可治颈淋巴结核及溃烂、寒热交替的驰张热。捣烂外敷,可治热肿丹毒,皮肤肿毒,并且可治风疹疥癣。治风气攻胸,做成汤来喝,立即见效。研成汁点红眼病也好。积雪草开花期在农历夏季五月份,相当与公历七月份左右。其最佳采收期在夏末秋初八九月份或秋后。积雪草可作为菜使用,亦可作为凉茶饮用[1],可用作补药,泻药,变质剂和解热,最有名的报道是长期使用植物的叶子可以改善记忆[2]。
积雪草的化学成分包括三萜类、多炔烯类、挥发油类等多种成分。其植物的活性成分是积雪草酸,积雪草皂苷,羟基积雪草酸,羟基积雪草苷,脂肪油,谷甾醇,单宁酸,一个树脂物质,积雪草碱(生物碱),维拉林果胶酸,抗坏血酸,两个皂苷- 玻热模甙和玻热米甙 ,三萜酸-玻热米酸,异玻热米酸和白桦酯酸和豆甾醇等[2]。其中积雪草苷(Asiaticoside,AT)以其药理活性丰富,临床作用广泛,成为积雪草中的主要活性成分。近年来,对积雪草苷开展了大量的研究证实,其显现有在心血管、免疫调节、皮肤科抗病毒等多种药理活性,因此其应用前景大,极具有开发价值。

 

目  录
中文摘要    II
英文摘要    III
目录    IV
1. 绪论    1
1.1 积雪草苷的理化性质与结构    1
1.2 积雪草苷的药理作用    2
1.3 积雪草苷提取纯化工艺的研究    3
1.4 积雪草苷分析方法的研究    4
2. 实验部分    5
2.1 实验材料和仪器    5
2.2 积雪草苷的 HPLC方法建立    6
2.3 正交试验提取工艺设计    10
2.4 积雪草苷的分离纯化    12
2.5 薄层色谱法鉴别积雪草苷粗品    14
3. 结果与讨论    16
3.1 积雪草苷提取工艺的结果与讨论    16
3.2 积雪草苷纯化工艺路线的结果与讨论    19
3.3 薄层色谱展开剂优化实验结果与讨论    20
4.总结与展望    23
致谢    24
参考文献    25

首先,本文建立了HPLC法测定积雪草苷提取物中积雪草苷含量的方法,采用Diamond C18 C18分析柱(250mm×4.6mm,5μm),室温为25℃,流动相乙腈:水=0.5:0.5 v/v,流速为 1.0ml/min,紫外检测波长为200nm条件。结果得到积雪草苷加标回收率为=100.42%,结果值RSD=1.44%。因此用此HPLC方法操作简单、准确,适用于积雪草苷提取物的质量控制。
然后,本文对积雪草有效成分积雪草苷的提取及分离纯化工艺进行了研究。以积雪草苷提取率为评价指标,采用L9(33)正交试验优选了乙醇提取积雪草苷,考察了乙醇浓度、料液比、提取时间对积雪草苷含量的影响,最后得到优化的工艺为以1:15料液比 60%乙醇回流提取 2h,其影响因素为乙醇浓度比>料液比>提取时间。减压蒸发回收乙醇,得积雪草苷醇提浸膏。
接着,取等量两份积雪草苷醇提浸膏分别用了路线I 石油醚-乙酸乙酯-正丁萃取体系及路线II 氯仿-正丁萃取体系对进行分离纯化,分别得到了积雪草苷粗品I和II。用上述HPLC方法对两种粗品的中积雪草苷的含量及提取率做了评价,得到积雪草苷粗品II 的含量为31.71%,积雪草苷粗品I 的含量为21.48%。并且粗品II 的质量是粗品I 的2.03倍。发现用路线II 氯仿-正丁萃取体系对积雪草醇提浸膏的分离纯化效果更好。
最后,通过薄层色谱实验对展开剂及其配比条件的摸索,得到以氯仿-甲醇-水体系及正丁醇-乙酸乙酯-水体系对积雪草苷粗品的分离效果最好,其中氯仿-甲醇-水(60: 15: 10)为最适合做进一步的柱层析色谱纯化过程的洗脱剂,但是因其毒性大不环保,因此可以考虑相对经济环保的正丁醇-乙酸乙酯-水(4:1:5)作为洗脱剂进行洗脱。
由于毕业论文实验的时间有限,因此没有做对积雪草苷粗品进一步的柱层析色谱的纯化。通过本文的研究希望能对积雪草苷提取纯化的研究及后续的进一步纯化提供实验依据。

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